ยงยุทธ มัยลาภ ทำงานเป็นแพทย์ ประจำวิทยาลัยแพทยศาสตร์พระมงกุฎเกล้า ใช้เวลาว่างในการเป็นผู้ประกาศข่าว พิธีกรรายการโทรทัศน์ ทางช่อง 5 จนได้รับรางวัลโทรทัศน์ทองคำ สาขาผู้อ่านข่าวดีเด่นชาย ปี พ.ศ. 2537 รางวัลเมขลา (รายการคลินิกวันหยุด) รางวัลผู้ใช้ภาษาไทยทางสื่อวิทยุโทรทัศน์ดีเด่น ปี พ.ศ. 2544

ด้านการเมือง เคยสมัครรับเลือกตั้ง ส.ส. กรุงเทพมหานคร เขต 5 สังกัดพรรคนำไทย แต่ไม่ได้รับเลือกตั้ง และเคยเป็นที่ปรึกษารัฐมนตรีว่าการกระทรวงสาธารณสุข[4] ต่อมาได้เข้ามารับตำแหน่ง โฆษกประจำสำนักนายกรัฐมนตรี ในรัฐบาลของพลเอกสุรยุทธ์ จุลานนท์ และได้ลาออกจาตำแหน่งในเดือนตุลาคม พ.ศ. 2550 โดยให้เหตุผลว่าไม่อยากเป็นที่ครหากรณีการถือครองหุ้น[5] จากนั้นจึงได้เข้าไปเป็นที่ปรึกษาสถาบันมะเร็งแห่งชาติ และเป็นแพทย์ประจำโรงพยาบาลพญาไท 2[6] ต่อมาในปี พ.ศ. 2557 ได้เข้ารับตำแหน่งโฆษกประจำสำนักนายกรัฐมนตรี เป็นครั้งที่สอง ในรัฐบาลของพลเอกประยุทธ์ จันทร์โอชา[7] ต่อมาเขาได้ขอลาออกจากตำแหน่ง เนื่องจากปัญหาสุขภาพ

นอกจากนั้นแล้วยงยุทธ มัยลาภ ยังเคยทำงานเป็นผู้ประกาศข่าว ประจำสถานีวิทยุโทรทัศน์กองทัพบก (ช่อง 5) และเคยเป็นประธานและกรรมการผู้จัดการใหญ่ บริษัท ดี.เอ็ม.อินเตอร์คอมมิวนิเคชั่น จำกัด อีกด้วย